Jing Cao, Yunfei Tian, Longfei Han, Xiaoping He, Liming Niu, Jiawei Liu, Fangyuan Zhang, Dongyue Wang, Jiangnan Li, Changjiang Weng, Jiajun Wu, Li Huang, Shaobin Shang
录用日期: 2026-01-08
目的:非洲猪瘟(ASF)严重威胁全球养猪业,开发亚单位疫苗首先需要鉴定关键保护性抗原。本研究旨在系统地评价非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白 pA151R 的抗原性、pA151R特异性T细胞的功能及其识别的T细胞表位。
方法:原核表达并纯化重组 pA151R 蛋白(rpA151R),制备抗rpA151R多克隆抗体(pAb),通过Western blot和间接免疫荧光试验验证其与真核转染和病毒感染表达的天然pA151R的反应性。利用ASFV减毒候选疫苗免疫猪,采用流式细胞术、细胞内因子染色分析pA151R特异性T细胞的动态变化与功能。采用IFN-γ ELISPOT试验和重叠多肽鉴定pA151R蛋白中的猪T细胞表位及表位特异性T细胞功能。通过乳酸脱氢酶(LDH)释放试验评估pA151R特异性T细胞对自体靶细胞的杀伤活性。
结果:抗rpA151R pAb能特异性识别真核表达和ASFV感染PAM细胞表达的天然pA151R蛋白。pA151R特异的T细胞应答和抗体水平分别在免疫猪后14和21天达到高峰。pA151R特异性T细胞可同时分泌 IFN-γ、TNF-α、IL-2和穿孔素,具有多功能T细胞的特征。T表位鉴定获得7个肽段:P2、P4、P5 仅被CD4⁺ T细胞识别,含有SLA-II类限制性表位;P6、P10、P12、P13特异性被CD8⁺ T细胞识别,含有SLA-I类限制性表位;P1、P7、P9可同时被CD4⁺ 和CD8⁺ T 细胞识别,含有SLA-I和II类限制性表位。这些多肽特异性CD4⁺或 CD8⁺ T细胞能够以剂量依赖的方式杀伤多肽冲击的自体靶细胞, 具有细胞毒活性。
结论与创新性:本研究系统评估了重组pA151R蛋白被ASFV减毒候选疫苗免疫猪外周血中特异性T细胞和抗体识别的抗原性,鉴定了pA151R特异性T细胞的功能和T细胞表位,证实pA151R是一个潜在的保护性抗原,可作为ASFV多组分亚单位疫苗的候选抗原。本研究的创新性在于:以ASFV免疫保护猪为模型,利用适用于猪的细胞免疫学研究方法,深入分析了pA151R特异性T细胞的多功能性和杀伤活性,绘制了pA151R蛋白的猪T细胞表位图谱,为筛选和评估其它ASFV编码蛋白的保护潜力提供了方法学依据。