通过研究榆紫叶甲(Ambrostoma quadriimpressum Motsch)成虫,比较吡虫啉、灭幼脲、阿维菌素对其离体保护酶(SOD和CAT)和解毒酶(CarE和GST)活性的影响,为杀虫剂的合理使用提供基础资料和理论指导。取榆紫叶甲成虫制取酶液,将吡虫啉、灭幼脲、阿维菌素3种农药配置成5个浓度梯度0.001、0.010、0.100、1.000、10.000 mg/L,测其对离体保护酶和解毒酶活性的影响。试验结果表明:0.010 mg/L吡虫啉、0.001 mg/L灭幼脲对CAT活性的抑制作用较强,抑制率分别为49.62%、52.11%,阿维菌素对CAT活性的抑制作用较弱;阿维菌素对榆紫叶甲成虫离体SOD活性虽有一定的抑制作用,但抑制作用较弱,高质量浓度的吡虫啉(>0.010 mg/L)对SOD活性具有促进作用;阿维菌素对榆紫叶甲成虫离体CarE的活性具有抑制作用,而吡虫啉、灭幼脲对离体CarE的活性具有促进作用;3种农药对榆紫叶甲离体GST活性均有抑制作用,其中吡虫啉抑制作用最强。由此可知,离体保护酶和解毒酶的活性与杀虫剂的种类直接相关,不同类型的杀虫剂对其影响差异显著。
Abstract
To provide basic data and theoretical guidance for the scientific use of pesticides, the effects of three kinds of pesticides on the activities of protective enzymes (SOD,CAT) and detoxifying enzymes (CarE, GST) in Ambrostoma quadriimpressum adult in vitro were studied. The enzyme solutions were prepared using Ambrostoma quadriimpressum Motschadult. Different concentrations of imidacloprid, chlorbenzuron and abamectin were prepared, which were 0.001, 0.010, 0.100, 1.000, 10.000 mg/L. Then effects of the three kinds of pesticides on the enzymes were analyzed. The results showed that the activity of CAT was greatly inhibited by 0.010 mg/L imidacloprid solution and 0.001 mg/L chlorbenzuron, and the inhibitory rate was 49.62% and 52.11%, respectively. However, the activity of CAT was slightly inhibited by abamectin. The activity of SOD was slightly inhibited by abamectin. The activity of SOD was induced by high concentrations of imidacloprid (>0.010 mg/L). The activity of CarE was inhibited by abamectin while it was induced by imidacloprid and chlorbenzuron. The three kinds of pesticides all inhibited the activity ofGST, but the imidacloprid showed the strongest inhibitory effect on GST. The results indicated that the activities of protective enzymes and the detoxifying enzymes in vitro were directly related to different kinds of pesticides, and the effects of the different type pesticides on the activities of in vitro enzymes were significantly different.
关键词
榆紫叶甲;杀虫剂;保护酶;解毒酶;酶活性
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Key words
Ambrostoma quadriimpressumMotsch; insecticide; protective enzyme; detoxifying enzyme; enzyme activity
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0 引言
硒是人体必需的一种微量元素
[1],具有调节免疫功能、抗大骨节病、抗衰老等作用
[2]。根据中国营养学会的推荐,健康的成年人每天摄入的硒营养范围是50~250 μg,而人体并不能合成硒元素,只能依靠外界汲取,大量研究表明,饮食是人体补充硒元素最安全有效的方法
[3-4]。中国有72%的国土面积是缺硒地带
[5],而土壤是植物吸收硒的主要来源,土壤缺硒会导致当地农产品硒含量偏低,因此,为确保农产品的硒含量标准,生产上现主要采用“富硒土壤+生物转硒技术”的方法,确保富硒土壤中硒元素有效的被植物利用转化成人体容易吸收的硒形态
[6]。目前研究较多的植物外源硒调控方式有2种:土壤施硒肥和叶片喷施硒肥,在黄芪
[7]、甘薯
[8]、马铃薯
[9]等领域已有大量相关报道。但前人发现:不同施硒方式处理下,同一作物品种的硒含量、产量和品质存在较大的差异,因此,根据植物的生长特性选择合适的施硒方式对生产富硒产品具有关键性作用。
粉葛为豆科植物甘葛藤(
Pueraria thomsonii Benth.)的干燥根
[10],是最早被收录中国药食同源名录的植物。粉葛块根内含有丰富的淀粉、氨基酸、异黄酮类等物质,其中葛根素是葛类植物特有的异黄酮类结构成分
[11],对扩张血管、降血糖、改善心脑血管等具有显著作用,同时粉葛兼备天然的富硒能力
[12]、生长适应性强、种植产量高等优点。因此,开发粉葛相关富硒保健品对提高其附加值、市场竞争力、农户增收具有重要意义。中国粉葛主产区分布在两广、云贵、江西等地区,其中广西是中国最大的粉葛集中生产基地,种植面积约10201 hm
2 [13],加之广西富硒土壤面积达212.1万hm
2[14]是全国至今发现的最大连片富硒土壤地带,发展富硒粉葛产业具有很好的基础优势。然而,富硒土壤生长的农产品不一定达到富硒标准
[15],有关粉葛富硒技术领域的研究至今只有少量的报道
[16-17]。因此,本试验将通过单施含硒有机肥、单施叶面硒肥、混合施用含硒有机肥和叶面硒肥4种方式,探求外源硒对粉葛硒积累、产量和品质的影响,以期为富硒粉葛生产提供数据及理论参考。
1 材料与方法
1.1 试验地点与材料
试验于2019年在广西壮族自治区南宁市上林县三里镇试验基地(23°29′48″ N,107°46′49″ E),土壤类型为石灰土,年平均气温19.8℃,前茬作物为冬瓜。在试验进行前,取0~30 cm土壤测定其理化性质,结果为: pH 7.71,全氮1.74 g/kg、全磷0.62 g/kg、全钾4.2 g/kg,有机质25.78 g/kg,碱解氮50.3 mg/kg,速效磷 61.56 mg/kg,速效钾248.2 mg/kg,全硒0.755 mg/kg。
本研究以粉葛品种‘桂粉葛1号’为材料。试验所用含硒有机肥(pH 8.82,总Se含量50.61 mg/kg,有效Se 0.81 mg/kg,有机质232.25 g/kg)和叶面硒肥(主要成分为Na2SeO3,Se含量0.18%)。
1.2 试验设计
试验主要围绕土壤施肥和叶面喷肥2个因素开展,试验设计4个处理:不施硒肥(CK);单施含硒有机肥(C1),用量18000 kg/hm2;单施叶面硒肥(C2),用量50000 mL/hm2;混合施用含硒有机肥和叶面硒肥(C3),且2种施肥方式联合处理的用量与单一处理相同。各处理重复3次,采用随机区组排列和起垄种植方式,试验小区面积为25 m2,小区内共种植3行,每行定植10株。
基肥包括尿素(含N 46.4%)90 kg/hm2,过磷酸钙(含P2O5 18%)90 kg/hm2,硫酸钾(含K2O 52%)135 kg/hm2,在整地时施入;单施含硒有机肥与基肥一起施入;叶面施硒肥在粉葛块根膨大的前、中期各喷施1次,每次喷施硒肥量相同,对照喷施等量的清水。在第二次叶面喷硒肥的两周后进行植株的光合测定。
1.3 试验测定
土壤基本理化性质测定参照鲍士旦主编的《土壤农化分析》
[18]。光合特性的测定采用LI-6400便携式光合作用测定。植株硒的测定方法参照国家标准方法(GB 5009.93—2010),土壤硒的测定参照农业行业标准(NY/T 1104—2006),采用SA-20原子荧光形态分析仪测定植物和土壤的硒含量。淀粉含量采用蒽酮比色法测定,葛根素含量采用液相色谱法(选用LC-20AT日本岛津高效液相色谱仪)测定。
1.4 相关参数计算与数据处理
各指标计算公式如式(1)~(2)所示。
粉葛硒转运系数(TF)=粉葛各器官(叶、藤、芦头)硒含量(mg/kg)/块根硒含量(mg/kg)
(2)
试验数据采用Microsoft Excel 2010整理制图,由SPSS 21.0统计软件对不同处理数据进行单因素方差分析和多重比较。
2 结果与分析
2.1 不同施硒方式下的粉葛各器官硒含量
如表1所示,与对照相比,单施含硒有机肥处理下粉葛叶、藤、芦头及块根等各器官硒含量均无显著差异;同时,有叶面施硒方式参与的处理(C2,C3),粉葛各器官的硒含量显著高于CK及单施含硒有机肥处理(C1)。就最为关注的块根硒含量而言,单施叶面硒肥处理下块根硒含量比单施含硒有机肥处理提高了71.0%,而混合施用含硒有机肥和叶面硒肥处理下块根硒含量比单施含硒有机肥处理提高了110.1%,可见叶面硒肥的施用对块根硒含量的吸收促进效果好于单施含硒有机肥,而在施用叶面硒肥的同时配合施用含硒有机肥则更好的促进了粉葛块根中硒的吸收。
处理 | 叶 | 藤 | 芦头 | 块根 |
CK | 0.376±0.022b | 0.244±0.008b | 0.121±0.009b | 0.053±0.003c |
C1 | 0.540±0.051b | 0.225±0.006b | 0.127±0.006b | 0.069±0.003c |
C2 | 9.284±1.172a | 0.419±0.042a | 0.267±0.027a | 0.118±0.010b |
C3 | 10.155±1.471a | 0.515±0.054a | 0.239±0.023a | 0.145±0.007a |
| 注:不同小写字母表示不同处理间差异显著(P<0.05)。 |
2.2 不同施硒方式下的粉葛硒转运系数
从表2可看出,单施叶面硒肥处理下叶/块根TF值比单施含硒有机肥处理提高了902.9%,而混合施用含硒有机肥和叶面硒肥处理下叶/块根TF值比单施含硒有机肥处理提高了805.3%,说明有叶面施硒方式参与的处理(C2,C3)叶/块根TF值显著高于CK及C1处理,且明显高于藤/块根、芦头/块根的TF值,表明叶面硒肥处理下大量的硒留在叶片,并由叶片转运到了块根中;而各处理的藤/块根、芦头/块根TF值无显著差异则暗示藤和芦头器官在硒由叶片向块根中转运过程中并无阻隔截留作用。
表2 不同施硒方式下粉葛硒的转运系数(TF) mg/kg |
处理 | 转运系数(TF) |
叶/块根 | 藤/块根 | 芦头/块根 |
CK | 4.42±0.28b | 2.92±0.11a | 1.418±0.091a |
C1 | 4.91±0.47b | 2.05±0.04b | 1.150±0.032a |
C2 | 49.24±4.41a | 2.22±0.06b | 1.427±0.131a |
C3 | 44.45±8.79a | 2.25±0.36b | 1.046±0.162a |
2.3 不同施硒方式下的粉葛产量
由表3可知,与对照相比,C1、C2、C3处理下粉葛块根产量分别提高了2.40%、4.74%和7.65%,且C2、C3处理下块根产量增产明显,并达到了显著差异水平,而C1处理对粉葛块根产量并没有显著性影响;各处理的商品薯产量在27.68~29.53 t/hm2范围内,C1、C2、C3处理相比CK,分别提高了3.25%、7.56%和9.19%,经过施肥处理的商品率指标均高于对照处理,其中C2、C3处理的商品率高于CK和C1处理。
处理 | 产量/(t/hm2) | 商品薯产量/(t/hm2) | 商品率/% |
CK | 28.00±0.66c | 26.81±0.79c | 95.73 |
C1 | 28.68±0.16bc | 27.68±0.23bc | 96.53 |
C2 | 29.33±0.13ab | 28.84±0.08ab | 98.31 |
C3 | 30.14±0.12a | 29.53±0.07a | 97.96 |
2.4 不同施硒方式下块根及商品薯硒积累量
如图1所示,不同处理下粉葛硒积累量分别为1.48、1.98、3.46、4.37 g/hm2,C3处理粉葛硒积累量最高比对照提高了194.47%;商品薯硒积累量同样表现为C3>C2>C1>CK,C3处理粉葛商品薯的硒积累量达4.28 g/hm2,比对照增加了201.41%。结果表明,C2、C3处理的粉葛硒积累量显著高于对照和和C1处理。
2.5 不同施硒方式对粉葛光合特性的影响
从图2可以看出,叶面硒肥、混合施用含硒有机肥和叶面硒肥处理下粉葛光合效率表现最强。在净光合数率指标中,C3处理达到最大值为11.61 μmol/(m2·s),C1处于最低值为6.55 μmol/(m2·s),二者呈显著性差异。混合施用含硒有机肥和叶面硒肥处理下的气孔导度最大,为0.167 mmol/(m2·s),其他处理均在0.07~0.08 mmol/(m2·s),与CK、C1、C2处理达到差异性水平。C3处理蒸腾速率最高4.86 mmol/(m2·s)比CK提高了106.80%。C1、C3处理叶片胞间CO2浓度指标均与CK呈显著差异,其中C3处理胞间CO2浓度也达到最大值261.51 μmol/mol。
2.6 不同施硒方式下的葛根素含量
根据图3可知,单施含硒有机肥、单施叶面硒肥、混合施用含硒有机肥和叶面硒肥3种方式均能提高葛根素的含量,其中C1处理葛根素含量最高,达0.12%,比对照显著提高了33.87%,C2,C3处理的葛根素含量分别为0.09%、0.08%,各施硒方式处理的葛根素含量差异没有达到显著水平。
3 结论
本研究结果表明,单施叶面硒肥对提高粉葛产量、品质及硒吸收积累量总体上要好于含硒有机肥,叶面调控方式能够将更多的硒转运粉葛的地下部分,而混合施用含硒有机肥和叶面硒肥则能更好的促进粉葛块根中硒的吸收累积。
4 讨论
据报道,土壤中只有少量的硒形态能被植物直接吸收利用,因此,人们通过土壤补硒和叶面施肥的方式使作物达到富硒水平
[19]。本研究表明,单施含硒有机肥处理下(C1)粉葛各器官硒含量无显著提高,单施叶面硒肥处理(C2)块根硒含量比C1处理提高了71.0%,而混合施用含硒有机肥和叶面硒肥处理(C3)块根硒含量比C1处理提高了110.1%,硒生物强化效果表现为C3>C2>C1>CK,说明单施硒肥方式并不能使粉葛的硒生物强化吸收达到最大阀值,但混施硒肥可以促使粉葛的根部与叶面同时吸收硒元素,而不是发生互相拮抗现象,龙友华等
[20]和廖青等
[21]的研究报告中也表明叶片和土壤同时处理的富硒效果要优于单一处理方式。
本试验中各处理粉葛的不同器官硒含量表现:叶>藤>芦头>块根,说明成熟期中粉葛的硒元素主要积累在叶面,藤和芦头次之,块根分配的硒含量最少,朱盼等
[22]在对不同产地粉葛不同部位中成分测定的结果也显示粉葛叶中的硒含量最高。殷金岩等
[9]研究表明马铃薯在成熟期时,叶片富集的硒高于茎,块茎的硒含量最低。从粉葛硒元素转运系数(TF)分析来看,有叶面硒肥参与的处理(C2,C3)叶/块根TF值比C1处理分别提高了902.9%、805.3%,而各处理的藤/块根、芦头/块根TF值无显著差异,说明大量的硒由叶片转运到了块根中,藤和芦头器官在硒由叶片向块根中转运过程中并无阻隔截留作用,郭文慧等
[8]关于紫甘薯对硒的积累研究也发现植株体内的硒元素从地上向地下转运的特征。
有叶面硒肥参与的处理增产效果优于对照和单施含硒有机肥处理,结合本试验光合特性数据分析,C3处理CO
2浓度、蒸腾速率和气孔导度的指标都要高于其它处理,说明叶面施硒肥更有利于提高粉葛的光合效率和抗氧化能力,促进光合产物的积累。加之粉葛属藤本植物叶面积指数较大,叶面喷肥方式能够使更多的硒肥附着叶片及时吸收转运,而土壤施含硒有机肥的硒元素易被土壤的铝、铁胶体等物质固定,降低硒的生物有效性
[23],本研究结果与前人的研究相似
[24-25],C2、C3处理的粉葛硒积累量显著高于对照和单施含硒有机肥处理。另外,各硒肥处理均提高了葛根素的含量,但施肥处理之间的结果差异不显著,何含杰等
[26]研究表明低浓度亚硒酸钠可促进三裂叶野葛的异黄酮生物合成,高浓度的硒则抑制异黄酮的积累,由此推断葛根素含量变化与植株体内富集的硒浓度有关,与施硒方式关系不大,接下来硒含量水平如何影响粉葛有效成分的积累还需进一步研究。
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脚注
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