无核葡萄SRAP-PCR反应体系的建立和优化

张旭彤 张朝红 肖宇 王跃进

中国农学通报. 2011, 27(16): 227-232

中国农学通报 ›› 2011, Vol. 27 ›› Issue (16) : 227-232. DOI: 10.11924/j.issn.1000-6850.2010-3137
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无核葡萄SRAP-PCR反应体系的建立和优化

  • 张旭彤 张朝红 肖宇 王跃进
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Optimization of SRAP-PCR System in Seedless Grape

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摘要

以大粒无核葡萄‘皇家秋天’的基因组DNA为模板,对无核葡萄SRAP-PCR反应体系的主要成分及反应退火温度进行优化。获得的最优SRAP-PCR反应程序为94℃预变性5 min,94℃变性1 min,38℃复性1 min,72℃延伸1 min,5个循环;94℃变性1 min,56℃复性1 min,72℃延伸1 min,35个循环;72℃终延伸10 min。25 μL体系中,模板DNA 40 ng,Mg2+ 1.5 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,引物0.2 μmol/L,Taq DNA聚合酶0.6 U。实验结果表明,优化后的SRAP-PCR反应体系扩增多态性高,带型清晰,稳定性好。

Abstract

In this research, annealing temperatures and several key parameters of the seedless grape SRAP-PCR reaction system were optimized. The result showed that for seedless grape, the most suitable protocol of SRAP-PCR was initially denaturing at 94℃ for 5 min, then 94℃, 1 min, 36℃ 1 min, and 72℃, 1 min for the first five cycles, and then the annealing temperature was raised to 53℃ for another 35 cycles, at last extending at 72℃ for 10 min. In this SRAP-PCR system, the optimum concentrations of Mg2+, dNTPs, Taq DNA polymerase, primers and DNA template were 1.5 mmol/L, 0.2 mmol/L, 1.0 U, 0.2 μmol/L, 40 ng/25 μL, respectively.

关键词

优化

Key words

optimization

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张旭彤 张朝红 肖宇 王跃进. 无核葡萄SRAP-PCR反应体系的建立和优化. 中国农学通报. 2011, 27(16): 227-232 https://doi.org/10.11924/j.issn.1000-6850.2010-3137
Optimization of SRAP-PCR System in Seedless Grape. Chinese Agricultural Science Bulletin. 2011, 27(16): 227-232 https://doi.org/10.11924/j.issn.1000-6850.2010-3137

参考文献

张旭彤 张朝红 肖宇 王跃进 .无核葡萄SRAP-PCR反应体系的建立和优化.中国农学通报 ,2011,27(第16期7月): 227-232

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