苹果MdRCD1基因的表达分析以及功能的初步鉴定

李浩浩, 曲丰佳, 安建平, 李睿, 郝玉金, 王小非, 由春香

果树学报. 2017, 34(05): 525-533

果树学报 ›› 2017, Vol. 34 ›› Issue (05) : 525-533. DOI: 10.13925/j.cnki.gsxb.20160320
论文

苹果MdRCD1基因的表达分析以及功能的初步鉴定

  • 李浩浩, 曲丰佳, 安建平, 李睿, 郝玉金, 王小非, 由春香
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摘要

【目的】分离克隆苹果MdRCD1基因,分析其蛋白结构和逆境响应,并初步鉴定MdRCD1在苹果愈伤中的功能。【方法】同源克隆MdRCD1并测序,用DNAman和MEGA5相关软件分析MdRCD1氨基酸序列以及进化关系,不同逆境处理‘嘎拉’苹果组培苗,qRT-PCR分析MdRCD1在逆境条件下的表达量。农杆菌介导的遗传转化方法获得过量表达MdRCD1的转基因愈伤,不同盐浓度处理野生型和转基因愈伤,观察愈伤的长势,检测愈伤的鲜质量、脯氨酸和丙二醛含量,鉴定MdRCD1的初步功能。【结果】从‘嘎拉’苹果中克隆了MdRCD1(MDP0000234325)基因。该基因ORF为1 803 bp。通过进化树和蛋白同源性分析,表明苹果MdRCD1和中国白梨PbRCD1进化亲缘关系最近。在MdRCD1的N端有1个保守的WWE结构域,1个PARP催化中心,在C端有1个RST结构域。qRT-PCR实验表明MdRCD1在苹果各个组织器官中都有表达,在茎中的表达量高于其他组织;同时MdRCD1的表达受Na Cl、ABA、渗透胁迫等逆境胁迫的诱导。通过农杆菌侵染获得过量表达MdRCD1转基因苹果愈伤。盐胁迫处理条件下,过量表达MdRCD1的抗性明显提高。【结论】MdRCD1在进化过程中比较保守,苹果不同组织中都有表达,过量表达MdRCD1苹果愈伤的抗盐性得到提高。

关键词

苹果 / MdRCD1 / 基因克隆 / 表达分析 / 盐胁迫

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李浩浩, 曲丰佳, 安建平, 李睿, 郝玉金, 王小非, 由春香. 苹果MdRCD1基因的表达分析以及功能的初步鉴定. 果树学报. 2017, 34(05): 525-533 https://doi.org/10.13925/j.cnki.gsxb.20160320

基金

农业部公益性行业科研专项(21203075-3); 国家自然科学基金(31471854);国家自然科学基金(重点项目)(31430074)

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