[目的]研究伊春森林猪源植物乳杆菌的生物学特性,全面评价其在益生菌制剂开发方面的应用潜力。[方法]对分离自黑龙江省伊春市健康森林猪粪便的1株乳酸菌（P1M1株）进行生化鉴定,利用细菌16S rDNA序列PCR扩增及测序技术进行分子生物学鉴定。绘制菌株生长曲线及产酸曲线,评价菌株对酸（pH值为2.0、3.0、4.0）和胆盐（浓度为0.15%和0.30%）的耐受性,考查菌株对13种抗菌药物的敏感性及其对猪源金黄色葡萄球菌的抑制作用,测定菌株的自由基清除能力及胞外多糖产量,评价菌株对小鼠的安全性。[结果]结合生化鉴定结果和分子生物学鉴定结果,将P1M1株鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum,L. plantarum）。L. plantarum P1M1株具有糖酵解能力;培养2~10 h为对数生长期,18 h后培养基pH值稳定在3.8~3.9;在pH值为2.0、3.0、4.0条件下的3 h存活率分别为（48.97±0.61）%、（64.19±0.94）%、（78.44±1.36）%,在0.15%和0.30%胆盐浓度下的3 h存活率分别为（53.86±1.14）%、（32.87±0.75）%;对红霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、妥布霉素、氨苄西林、阿莫西林、头孢哌酮、头孢拉定、头孢他啶敏感;对猪源金黄色葡萄球菌表现出明显的抑制作用;无细胞上清液对DPPH自由基、羟自由基、ABTS自由基的清除率分别为（91.65±1.44）%、（87.32±0.22）%、（89.79±0.59）%,均显著（P<0.05）高于完整细胞菌悬液;胞外多糖产量为（796.73±2.43）mg/L;小鼠连续灌胃L. plantarum P1M1株2周后,未见死亡及器官病变。[结论]森林猪源L. plantarum P1M1株进入对数生长期快,具有糖酵解特性和较强的产酸能力,耐受酸和胆盐,对多种抗菌药物敏感,可抑制猪源金黄色葡萄球菌生长,抗氧化能力强,胞外多糖产量高,对小鼠具有安全性,可作为益生菌制剂开发的候选菌株。

[目的]分离、鉴定新疆维吾尔自治区呼图壁县驼乳源乳酸菌,评价其对金黄色葡萄球菌的抑制作用。[方法]从呼图壁县某驼场采集健康驼乳样本45份,使用MRS培养基分离乳酸菌,采用细菌16S rDNA序列PCR扩增及测序方法进行分子生物学鉴定。利用点种法、琼脂斑点法和牛津杯双层琼脂扩散法筛选对金黄色葡萄球菌ATCC 29213具有抑制作用的乳酸菌。将MRS培养基的pH值调节至1~10,测定乳酸菌的耐酸能力;在MRS培养基中添加0~0.30%的牛胆盐,测定乳酸菌的耐胆盐能力。应用微量肉汤倍比稀释法测定乳酸菌无细胞上清液（cell-free culture supernatant,CFCS）对金黄色葡萄球菌ATCC 29213的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）和亚抑菌浓度（subinhibitory concentration,SIC）;考查CFCS在不同pH值条件下及经酶处理后对金黄色葡萄球菌ATCC 29213的抑制作用变化,初步分析CFCS的抑菌活性物质;利用牛津杯双层琼脂扩散法测定CFCS对驼乳源和奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌野生株的抑制作用。[结果]从45份驼乳中分离得到5种20株乳酸菌,分别为粪肠球菌（Enterococcus faecalis,n=13）、鼠李糖乳杆菌（Lacticaseibcillus rhamnsus,n=1）、发酵黏液乳杆菌（Limosilactobacillus fermentum,n=3）、副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei,n=1）和融合魏斯氏菌（Weissella confusa,n=2）。经3种方法筛选,鼠李糖乳杆菌KC4株对金黄色葡萄球菌ATCC 29213的抑菌作用最强,且具有良好的耐酸和耐胆盐特性,在pH值为4~7和牛胆盐浓度为0~0.20%的条件下均可正常生长。KC4株的CFCS对金黄色葡萄球菌ATCC 29213的MIC和SIC分别为62.5 mg/mL和7.812 5 mg/mL;在pH值为2~5时仍具有抑菌效果,经过胃蛋白酶、过氧化物酶、胰蛋白酶、肽酶、蛋白酶K、过氧化氢酶和木瓜蛋白酶处理后抑菌效果极显著（P<0.01）降低;对驼源和牛源金黄色葡萄球菌野生株均具有良好的抑菌效果。[结论]在呼图壁县驼乳中筛选出1株对金黄色葡萄球菌标准菌株以及驼源和牛源金黄色葡萄球菌野生菌株均具有较强抑制作用的鼠李糖乳杆菌,具有较强的耐酸和耐胆盐能力,其抑菌活性物质可能包括酸、过氧化物和蛋白类物质等。研究结果为驼乳源乳酸菌的开发利用提供了潜在菌种资源。

[目的]研究蒙药红花清肝十三味丸（HHQG）通过抑制炎性细胞浸润改善小鼠肝损伤的作用机制。[方法]选取6~8周龄的雄性C57BL/6小鼠54只,随机分为对照组、模型组和HHQG保肝组,每组18只。HHQG保肝组连续7 d每天灌胃1次HHQG,剂量为0.616 5 g/（kg·BW）,对照组和模型组每天灌胃1次等体积的生理盐水;第7天灌胃4 h后,对照组腹腔注射剂量为0.1 mL/（10 g·BW）的橄榄油,模型组和HHQG保肝组均腹腔注射等剂量的CCl₄与橄榄油混合物（CCl₄∶橄榄油=1∶4,V/V）。肝损伤造模后第2、5、7天,通过检测血清谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）活力、观察肝脏组织病理学变化（HE染色及Masson染色）,评价肝损伤模型制备是否成功以及HHQG对肝损伤的缓解作用;通过免疫组织化学技术检测肝脏组织中性粒细胞和单核/巨噬细胞浸润情况;应用免疫组织化学技术和反转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术分析肝脏组织中炎性因子TNF-α的表达情况;运用转录组测序（RNA-seq）及RT-qPCR技术分析HHQG对肝脏组织中黏附分子基因表达的影响。[结果]综合多项评价指标,模型组小鼠出现明显的肝损伤症状,提示CCl₄诱导的肝损伤模型制备成功。与模型组相比,肝损伤后第2天,HHQG保肝组小鼠血清中AST和ALT活力极显著（P<0.01）降低。HHQG可减少肝损伤区域中性粒细胞和单核/巨噬细胞等炎性细胞浸润,缓解胶原纤维物质沉积,通过促进肝细胞增殖进行组织修复。HHQG保肝组小鼠肝损伤区域TNF-α表达量减少;与模型组相比,肝损伤后第2、7天以及第5天,HHQG保肝组的肝脏组织中TNF-α基因的mRNA相对表达量分别极显著（P<0.01）和显著（P<0.05）降低。转录组数据分析表明,HHQG可显著下调肝损伤后与中性粒细胞和单核/巨噬细胞浸润相关的黏附分子基因群;RT-qPCR验证试验结果显示,与模型组相比,肝损伤后第5、7 天,HHQG保肝组的肝脏组织中VCAM-1基因的mRNA相对表达量极显著（P<0.01）降低;肝损伤后第2天以及第5、7天,HHQG保肝组的肝脏组织中ICAM-1基因的mRNA相对表达量分别显著（P<0.05）和极显著（P<0.01）降低。[结论]HHQG通过减少以中性粒细胞和单核/巨噬细胞为主的炎性细胞浸润,下调肝损伤区炎性因子TNF-α的表达,以及抑制黏附分子的表达,减轻肝损伤后发生的炎症,从而发挥抗炎保肝作用。

[目的]探讨红花清肝十三味丸（HHQG）通过激活肝细胞核因子4α（hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α）改善肝功能的保肝作用机理。[方法]将45只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、CCl₄损伤组、HHQG组,每组15只;HHQG组小鼠灌胃剂量为0.616 5 g/（kg·BW）的HHQG,每天1次,持续7 d,对照组和CCl₄损伤组灌胃等体积的无菌蒸馏水;末次灌胃4 h后,对照组小鼠腹腔注射剂量为5 mL/（kg·BW）的橄榄油,CCl₄损伤组和HHQG组小鼠腹腔注射相同剂量的CCl₄与橄榄油混合液（CCl₄∶橄榄油=1∶4,V/V）进行肝损伤造模;分别在造模后第2、5、7天采集各组小鼠血液及肝脏组织样本;记录各组小鼠在试验期间的体重;测定血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）及总超氧化物歧化酶（SOD）活力;采用HE染色法及Masson染色法观察肝脏病理组织学变化;应用转录组测序（RNA-seq）技术分析差异基因富集通路;利用免疫组织化学技术检测HNF4α蛋白的表达情况。[结果]与对照组相比,在造模后第1~4天以及第6~7天,CCl₄损伤组小鼠体重显著（P<0.05）或极显著（P<0.01或P<0.001）降低;与CCl₄损伤组相比,在造模后第4天以及第6~7天,HHQG组小鼠体重显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）增加。与对照组相比,在造模后第2天,CCl₄损伤组小鼠血清ALT和AST活力极显著（P<0.001）升高;与CCl₄损伤组相比,在造模后第2天,HHQG组小鼠血清ALT和AST活力显著（P<0.05）降低。HE染色及Masson染色观察结果显示,在造模后第2、5、7天,与CCl₄损伤组相比,HHQG组小鼠肝脏组织损伤程度明显改善。KEGG信号通路富集分析表明,与CCl₄损伤组相比,HHQG组小鼠肝脏组织中过氧化物酶体增殖物激活受体、脂肪酸降解、脂肪酸代谢等信号通路上调,核糖体、甘油磷脂代谢、甲状腺癌症等信号通路下调。与CCl₄损伤组相比,HHQG组小鼠肝脏组织中与肝脏分化相关的基因群（HNF4α、ATF5、Cebpb等）显著上调。免疫组织化学分析显示,与CCl₄损伤组相比,在造模后第2、5天,HHQG组小鼠肝脏组织中HNF4α表达量明显增加。[结论]HHQG通过激活HNF4α,抑制肝脏氧化损伤、促进肝脏组织修复以及维持肝脏功能,改善小鼠肝损伤,从而发挥保肝效应。