Acta Agric Zhejiangensis.
2022, 34(01):
60-69.
为建立中华鳖胚胎肝成纤维细胞的体外分离培养体系,研究聚肌苷酸胞苷酸(Poly I:C)刺激对细胞干扰素生成通路相关因子的影响,从而最终构建基于该成纤维细胞的干扰素生成通路激活模型,以发育至23期的中华鳖胚胎为实验材料,采用胰蛋白酶消化法得到肝成纤维细胞,结合细胞形态学、生长曲线和PCR法进行鉴定,并分析其生物学特性。之后,用Poly I:C转染细胞24 h,检测细胞形态和干扰素生成信号通路相关因子的基因和蛋白表达水平。结果表明:应用构建的体外分离培养体系得到的中华鳖胚胎肝成纤维细胞生长状况良好,成功传至20代,该细胞的生长曲线为"S"形,符合细胞增殖规律,可检测到成纤维细胞标记基因VIM和ACTA2,确定为成纤维细胞。冻存前后,细胞存活率分别为90.51%和82.95%。Poly I:C转染后,RIG-Ⅰ和MAVS蛋白的表达量上调,RIG-Ⅰ基因的表达量上调,m~6A和YTHDF2基因的表达量下调,并引起细胞形态的变化。综上,本研究成功建立了中华鳖胚胎肝成纤维细胞的体外分离培养体系,并构建了基于该细胞的干扰素生成通路激活模型。