为建立人工栽培桑黄瓦宁纤孔菌的HPLC指纹图谱，采用化学计量学分析方法对其进行分析和筛选出桑黄的4个标志性成分，并以其中最主要成分Hypholomine B为指标建立含量测定方法。参照2020年版《中国药典》(四部)通则中高效液相色谱法，建立桑黄指纹图谱，利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004 A版”评价其相似度，确定共有峰，同时测定桑黄中苯乙烯吡喃酮类成分Hypholomine B的含量。结果表明，建立了10批桑黄的HPLC指纹图谱，共有12个共有峰，相似度均大于0.92。系统聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)结果一致，将样品分为两类。在1.25～20.00μg范围内，Hypholomine B的进样量与峰面积具有良好的线性关系(R~2=0.999 9);精密度、稳定性和重复性试验的相对标准偏差(RSD)值均小于2.0%(n=6);加样回收率为95%～99%,其RSD值为1.48%;10批桑黄样品中Hypholomine B的含量范围为0.15%～0.95%。指纹图谱与HCA、PCA和OPLS-DA相结合可全面地评价桑黄药材质量，该方法稳定、可靠，可为桑黄质量评价提供参考。