杨鑫, 王建俊, 徐浩, 李俊贤, 任涛, 欧德渊
探讨H6N6亚型禽流感病毒的感染量、感染时间与被感染的RAW264.7细胞炎性因子水平变化的相关性,为建立RAW264.7细胞体外炎症模型提供参考。根据Reed-Muench法计算病毒滴度(TCID_(50)),以100 TCID_(50)的H6N6亚型禽流感病毒感染RAW264.7细胞2 h,弃病毒液,加入含5%FBS的DMEM培养液继续培养,分别于12,24,48 h收集上清液或细胞,CCK8测定细胞活力;透射电子显微镜检测细胞超微结构;ELISA检测小鼠白介素-1β(IL-1β)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;qRT-PCR检测IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α m RNA表达水平。结果表明:H6N6感染各时间段细胞活力显著下降(P<0.01);细胞中线粒体肿胀,自噬体增多;IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-α含量显著升高(P<0.01);IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α mRNA表达水平显著升高(P<0.01),感染24 h最高。成功构建了H6N6亚型禽流感病毒体外感染RAW264.7细胞模型,为进一步研究其致病机制提供参考。